west
west blot滤纸和海绵的作用？
blot滤纸和海绵的作用？
滤纸最主要的用处是分离混合在一起的液态及固态物质，除此之外还用于托盘天平称量腐蚀性固体时放在托盘上防止腐蚀，另外由于滤纸吸湿性能较好，还用于擦干一些与浓度有关仪器
western blot电泳原理？
（本实验以转移到PVDF膜，辣根过氧化物酶HRP-ECL发光法为例）在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）中，不连续系统的凝胶包括浓缩胶（spacergel）和分离胶(separation gel)，蛋白质在浓缩胶中运动到两层凝胶的交界处时，由于凝胶孔径的不连续性使样品迁移受阻而压缩成很窄的区带，即不连续系统的浓缩效应。
在凝胶中，分子量小的蛋白质泳动速度快，分子量大的蛋白质泳动速度慢，即聚丙烯酰胺凝胶的分子筛效应。阴离子去污剂SDS使蛋白质变性，消除不同蛋白分子间的电荷差异和结构差异，使得蛋白质在电场中的泳动速度仅与蛋白质颗粒大小有关。各种蛋白质在不连续SDS-PAGE的浓缩效应和分子筛效应的作用下，按照分子量大小以一定顺序排列形成一个个区带。
做western blot实验，怎么煮蛋白？
根据样品形式的差异进行选择。
如果是研究纯化的蛋白，可以用100℃，煮5min就行；
如果是研究细胞样品的膜蛋白，可以用膜蛋白抽提试剂盒先做目的蛋白的富集，而后同上处理
western blot转膜是怎么做的？
蛋白免疫印迹( Western Blot) 是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上。
目前主流方法是电转印法，分为湿式转印与半干转印。
湿式转印是将胶块垂直方向夹在湿式转印槽内进行电转印。
以E-Blotter湿转槽为例，一般使用垂直电泳槽的缓冲液槽体，将内部垂直电泳电极替换为湿转的转印芯，将胶块、滤纸、转印棉夹到转印芯内部，将槽体倒满缓冲液通电进行电转印。
半干转印是将胶块水平方向夹在半干转印槽内进行电转印。
以Yrdimes半干转印槽为例，将滤纸、转印棉用缓冲液浸润后，与胶块一起夹到转印槽内，通电进行电转印。
一般来说湿转相对半干转印速度上要慢，设备成本上半干转印槽也相对更贵。
通常小分子量的蛋白半干转效果比较好，大分子量（100KD）以上建议湿转。