分离胶和浓缩胶各自凝固时间
bis是什么基团？
bis是什么基团？
bis有机化学基团。其分子式为：(CF3SO2)2N-它可以与其它基团或元素构成化合物。Bis即甲叉丙烯酰胺。与arc丙烯酰胺一起形成arc-bis也就是丙烯酰胺单体贮液。arc-bis也就是丙烯酰胺单体贮液，形成的聚丙烯酰胺则是一种网状结构，可以做PAGE类的电泳，用来分离大分子。无论是浓缩胶还是分离胶中这两种物质都是有的，只是浓度不一样而已。
为什么先分离胶后浓缩胶？
上面是浓缩胶，下面是分离胶，所以先加分离胶，后加浓缩胶。这样做的原理是，浓缩胶先将蛋白质压成一条线，在再分离胶中按照不同的分子量大小分离。
浓缩胶和分离胶的PH值不同，前者主要表现为浓缩效用，后者表现为电荷效用和分子筛效用。
浓缩效应主要在浓缩胶中完成，浓缩胶的pH6.8，在这个pH条件下，缓冲液中的HCl的Cl离子几乎全部解离，Gly的等电点为6.0，仅少数解离为负离子，在电场中移动速度很慢。
westernblot点样后跑出的条带浓缩胶跑的条带是歪的？
是SDS-PAGE那步的时候吗？ 可能是浓缩胶凝固时间不够，如果是分离胶可能是没有水封一段时间 另外样品中如果含有高盐可能也会跑歪
分离胶太高怎么办？
1.可以适当进一步地拉开浓缩胶和分离胶之间的pH值，比如浓缩胶为pH6.6，分离胶为pH8.9。
2.可以考虑加高电泳时，浓缩胶的电压为90-100 V，分离胶的电压到120V-200V，；浓缩胶和分离胶有时候可能都设成150 V也能电泳成功。
3.使用全新配置的缓冲溶液。
4.适当该种胶浓度下使用分离效果明显的Marker。
5.保持各种蛋白质样品和Marker在上样前能够充分溶解，上样前最好离心一下，实在溶解不掉的颗粒就去掉。
6.适当调整聚丙烯酰胺的凝胶浓度。
7. 聚丙烯酰胺的充分聚合，可提高凝胶的分辨率。建议做法：待凝胶在室温凝固后，可在室温下放置一段时间使用。忌即配即用或4度冰箱放置，前者易导致凝固不充分，后者可导致SDS结晶。一般凝胶可在室温下保存4天，SDS可水解聚丙烯酰胺。8.样品缓冲溶液用：Tris-HCl缓冲溶液，电泳缓冲溶液用:Tris–Gly缓冲溶液。9.分离胶的浓度应高于浓缩胶，但是胶浓度高会引起电泳时间变长，电泳时间会引起电泳带弥散。具体的参考的凝胶浓度参见附录。
10.控制好电泳时间，别把样品跑出了胶外。